赛默飞液相色谱仪
液相色谱仪是属于易学难用的仪器，特殊讲究“精确利用”和利用履历。
液相事情职员打仗最多的该当是流动相，流动相是造成液相色谱各种问题的紧张源头。
液相色谱仪常见的故障：一是堵，二是漏。下面这两点分别展开谈论。（注：流动相以甲醇为例，色谱柱以C18为例）
一、先谈论“堵”的情形。
“堵”的表现征象是柱压非常升高，直接缘故原由是流路不畅。堵塞的紧张位置是在色谱柱的前端，紧张缘故原由是流动相里有杂质，杂质的紧张来源是细菌。
1、“堵”的缘故原由：配制流动相时细菌污染。
首先，我们要认识到，一样平常的国产甲醇实在不须要额外过滤处理，直策应用没有问题。纵然是有些固态微粒杂质，也能在液相流路系统前真个过滤头上打消，真正随意马虎引起问题的，是水中的细菌。
新制备的纯水在室内放置几天会长菌，而这些细菌虽然肉眼不可见，却足以堵塞柱填料颗粒的空隙，造成柱子很快报废。这是在配制流动相时造成的细菌污染的缘故原由，办理它的方法很大略，确保水的可靠性。这里有两种办法推举：
（1）空想的办法当然是购买实验室专用纯水机，既方便又可靠，质量也放心。缺陷是价格不菲。
（2）成箱购买市售品牌纯净水，如，500mL一支的怡宝或娃哈哈，这些水的质量足以搪塞液相色谱的哀求。先随机抽取一支做一下细菌平板实验，待菌落数合格方可利用。这样每次只要单独开一支即可，也很方便。每次本钱2元旁边。
※这里特殊指出一个细节：在绝大多数书本上，凡谈到配制流动相都会谈到后面有一个过滤的步骤。但是从我们长期利用的实际效果来说，只要能担保水的质量，这一步完备可以也应该去除。
缘故原由有以下三点：
（1）流动相过滤在理论上有好处，但是，实际操作时由于不可能做到专瓶专用，反而随意马虎造成的交叉污染，对付配比繁芜的流动相影响更大。
（2）流动相过滤在经济本钱上不划算。买一套过滤装置要6000多元，且过滤器公认是比较随意马虎破坏的设备。紧张是过滤片的本钱太高，一片要几十元。按一样平常液相柱的正常利用寿命打算，过滤片的本钱会远远高于色谱柱的本钱。
（3）流动相过滤对付事情效率本钱不划算。利用溶剂过滤器有一个预洗濯、装备、利用、用后洗濯，晾干的过程，至少也有一个小时的韶光。这个本钱也不能忽略。
（4）在实际事情未创造流动相不过滤会对柱寿命有任何影响。我们最少有6年韶光没有做过流动相过滤的事情，但是和海内同行比较较，在同等利用强度下我们的柱寿命是比较长的。
2、“堵”的缘故原由：利用流动相时的细菌污染。
指的是：
流动相刚开始没有长菌，在利用时却产生了细菌污染。这紧张是在利用多元液相色谱仪时的一种不良利用习气造成的。
举大略的例子：
50％的甲醇水流动相，有两种利用办法。一种办法是在上机前配好稠浊在一起，另一种办法是在流路A放纯甲醇，流路B放纯水。
从纯挚实验效果来说，后一种有明显的优点：首先是大略，不须要实验者另个打算配比稠浊，其次是比例准确，能得到保留韶光重复性极好的实验效果。
但是，它有一个致命的毛病，纯水在流动相瓶中几天韶光会长细菌（很多情形下不仅仅用纯水作流动相，而是用缓冲盐溶液，本身是优质肥料，细菌长得更迅速），一旦有细菌柱子坏得很快。以是这种办法哀求操作职员每次实验都要用新制备的纯水，更哀求在每次实验后把水相换掉，换成甲醇冲洗干净，这一点在实际事情中很多人意识不强，意识到了但多次利用中总有一两次会遗漏，但是每每这一两次足以产生致命的影响。由于液相色谱柱的堵塞是不可逆的。
以是，宁肯捐躯小小的保留韶光的重复性，也不要用纯水溶液作为流动相的一组。从实际实验效果来说，我建议用10％的甲醇水代替纯水溶液（以前我做过火歧比例甲醇水的细菌总数实验，在5％基本可以抑菌，在10％及以上可以完备去菌了），这样可以有效打消长菌的隐患，既可作流动相，也可冲柱。在配制流动相时司帐算得麻烦一些，但是一次麻烦，终生受益。
3、“堵”的缘故原由：不适当操作。
常见问题的有以下几种：
（1）在改换零件时选择的型号有误，接口不是很匹配，在拧紧的时候产生变形而使得管路堵塞。
（2）样品处理液净化得不干净，长期会在六通阀和柱之间形成壅塞不畅。
（3）在利用手动六通阀时，有些人可能由于手劲小的缘故原由，迁徙改变的不到位，于是造成流路形成了去世堵，压力快速升高超过鉴戒值。
（4）在利用金属管路作出废液管时，应该把稳先在废液瓶中放一些水，并把废液管的出口端放在液面下。如果位于在液相上且实验利用较高浓度的缓冲盐溶液，在停机时可能在出口端结晶成块并造成堵塞。这种情形不常见，但却的确发生过。
二、讲讲查“堵”的方法。
在发生“堵”的征象后，须要找出缘故原由，紧张是什么位置发生了“堵”。把稳，绝大多数情形下，全体系统只会有一个地方发生堵塞。
查堵的方法是从尾向前逆向分段拆开，仔细不雅观察压力数值，如果某一个部件（柱子除外）装上和拆下时的压力差别很大，可发展变革判断。至于柱的堵塞，可以通过换同样规格的柱的压力是否同等来判断。
三、下面再谈一下“漏”的问题。
“漏”分两种：漏液和漏气。
1、漏液
液相色谱仪从流动相瓶到废液瓶之间的流路是一个全封闭体系，内部压力很高，但外部却能担保一滴不漏。如果某个部件发生了漏液，那是故障所在。
漏液的缘故原由分两种：
（1）打仗硬件不当
在改换零件如流路管或换柱时，换的接头接口不匹配，造成漏液。要把稳不同公司的柱子接头很多是不同的，乃至同一家公司在不同期间生产的液相柱接头也有很大差异。当然选用PEEK接头是一个较好的办理方法，不仅通用性好，而且靠手拧能担保不漏液。
纵然是接口本身是匹配的，但是如果操作不当也会漏液，一种不当是力度把握不好，拧得太紧或太松；另一种不当是致命的缺点：滑丝，这是每每是动手能力不太强，螺丝钉很少拧的事情者犯的缺点，滑丝的后果不仅是漏液那么大略，常造成主要部件的报废。办理这个问题只能靠恶补基本功来实验，那是拧螺丝。
（2）利用仪器不当
如果是运送泵漏液，常见的缘故原由是在活塞位置缓冲盐析出造成。
析出的缘故原由有两个，一是利用缓冲盐溶液时溘然加入了纯甲醇而析出，这种缺点很随意马虎避免，这是只管即便不要用纯的甲醇和纯水。只要相互有10％的比例是不会涌现这个问题。另一缘故原由是在用缓冲盐溶液（不论甲醇含量有多少）作流动相时，实验结束后没有换甲醇水冲洗，使得微渗的流动相关燥形成晶体造成。
不过，运送泵漏液并不是非得立时修不可，冲洗干净并在往后的利用中多加小心一样平常都可以正常利用。
检测器漏液是个很麻烦的事，一样平常都是接管池的问题，改换的用度相称高。但是并不是说一定要立时改换，还可以从实际实验效果看能否凑合利用。
2、漏气
漏液是从内部向外漏，而漏气则是外部的气体进入液相色谱仪的流路内部形成了气泡。下面按流路的方向逐个部件剖析产生气泡的缘故原由和相应办理方法。
（1）过滤头
抽液时，在流路管中有不规则但持续的小气泡产生，这时考虑的是流动相有没有脱气（须要特殊提醒纵然是有了真空脱气机也是要先超声脱气的，最少可以减少脱气机的事情压力并提高事情效率），如果已经脱了气，则要把稳过滤头的污染也会造成这种征象。处理方法比较大略，拧下过滤头在稀硝酸中浸泡，超声半小时，洗净后装回去即可。
（2）透明流路管
指的是在过滤头和运送泵之间的那一段管路。这一个部分每每不是有点气泡，而常常是全体管中全是空气而操作职员却浑然不知，甚至运送泵事情了半天才创造流动相瓶里的液体一点也没少。这也是我们常说的液相色谱仪至少一周要开机一次的缘故原由（我们做液相一定要有“微渗”的观点）。如果永劫光不用，这一段管路的液体会彻底干掉，而充满空气的管路和充满液体的管路不仔细看是分辨不出的。
这种情形对付运送泵很危险，由于，泵从设计来说是运送液体而不是气体，内部的液体对付活塞来提及到了机油的浸染，如果活塞杆上还残余了一些缓冲盐，则极易拉伤，造成不可逆转的影响。
对付这种情形，要突出“预防为主”，如，液相色谱利用职员要相对固定和稳定，事情中合理搭配资源，每台机一周击至少作一次实验，如长期不用最少每周要冲流动相2 小时。养成良好的事情习气很主要。
如果不慎涌现了这种问题怎么办？我的建议是用外力使管路中充满液体。详细如下：
①找到流路管进入运送泵的接头。
②拧下来。
③用一干净的洗耳球的尖部对准管路的平整切口。
④吸液体，看液面从流动相瓶里上升，至离洗耳球5 厘米旁边时停滞该动作。
⑤快速把接头拧回运送泵上（这个过程可能会有少许流动相外泄，这是正常征象）。
⑥开机，打开排液阀门，启动运送泵。
⑦等排液管中流出的溶液没有气泡时，再关闭排液阀，仪器正常事情。
（3）运送泵和柱子
这些部分进了气泡一样平常不怕，冲掉即可。
（4）检测器
该当说，全体流路中只要有一个气泡都会在检测器上得到强烈的旗子暗记反响，检测器内部的气泡一样平常都能被冲走，但也有很难冲掉的残留气泡的情形。
如果检测器里有残留气泡，会有特色明显的表现形式，是在走基线时会时时时光隔涌现直上直下旗子暗记很大的旗子暗记峰。这时先看普通流量能否冲走，如果冲不走，那只能拆柱，把检测器直接连到运送泵的出口，加大几倍流量冲洗，则肯定能冲走气泡。
以上，紧张讲的是液相色谱仪掩护与保养的办法方法，怎么检讨故障和用什么方法掩护及办理故障，先分享到这里，再见！
